無菌棚,無塵棚,無菌室

無菌棚,無塵棚,無菌室
什么是無菌棚,無塵棚,無菌室?
無菌棚一般是在微生物實驗室內專辟一個小房間?？梢杂冒宀暮筒ＡЫㄔ?。面積不宜過大，約4—5平方米即可，高2.5米左右。無菌棚外要設一個緩沖間，緩沖間的門和無菌棚的門不要朝向同一方向，以免氣流帶進雜菌。無菌棚和緩沖間都必須密閉。室內裝備的換氣設備必須有空氣過濾裝置。

一、無菌棚,無塵棚,無菌室標準化規程與驗收規范：

1.目的
本規程旨在為無菌操作及無菌室的保護提供一個標準化規程。
2、適用范圍、生測實驗室。
3、責任者、QC主管生測員。
4、定義無
5、安全注意事項；
嚴格無菌操作，防止微生物污染；操作人員進入無菌室應先關掉紫外燈。

二、規程：
1.無菌室應設有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應達到10000級，室內溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%。超凈臺潔凈度應達到100級。 

2.無菌室應保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。 

3.嚴防一切滅菌器材和培養基污染，已污染者應停止使用。 

4.無菌室應備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的....1%的新潔爾滅溶液，等等。 

5.無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。 

6.需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應包扎嚴密，并應經過適宜的方法滅菌。 

7.工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作。 

8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開超凈臺進行吹風。操作完畢，應及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。 

9.供試品在檢查前，應保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用70%的酒精棉球消毒外表面。 

10.每次操作過程中，均應做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。 

11.吸取菌液時，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。 

12.接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養物。 

13.帶有菌液的吸管，試管，培養皿等器皿應浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內消毒，24小時后取出沖洗。 

14.如有菌液灑在桌上或地上，應立即用5%石碳酸溶液或3%的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。 

15.凡帶有活菌的物品，必須經消毒后，才能在水下沖洗，嚴禁污染下水道。 

16.無菌室應每月檢查菌落數。在 超凈工作臺開啟的狀態下，取內徑90mm的無菌培養皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養瓊脂培養基約15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培養箱培養48小時，證明無菌后，取平板3～5個，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養箱培養48小時，取出檢查。
100級潔凈區平板雜菌數平均不得超過1個菌落，10000級 潔凈室平均不得超過3個菌落。如超過限度，應對無菌室進行徹底消毒，直至重復檢查合乎要求為止。

三、技術指導說明：
在獲得了無菌環境和無菌材料后，我們還要保持無菌狀態，才能對某種特定的已知微生物進行研究或利用它們的功能，否則外界的各種微生物很容易混入。

外界不相干的微生物混入的現象，在微生物學中我們叫做污染雜菌。防止污染是微生物學工作中十分關鍵的技術。
一方面是徹底滅菌，另一方面防止污染，是無菌技術的兩個方面。另外，我們還要防止所研究的微生物，特別是致病微生物或經過基因工程改造了的本來自然界不存在的微生物從我們的實驗容器中逃逸到外界環境中去。為了這些目的，在微生物學中，有許多措施。 

無菌室內的地面、墻壁必須平整，不易藏污納垢，便于清洗。工作臺的臺面應該處于水平狀態。無菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無菌室的紫外線燈距離工作臺面1 米。工作人員進入無菌室應穿滅過菌的服裝，戴帽子。 
當前無菌室多存在于微生物工廠，一般實驗室則使用超凈臺。超凈臺其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺面上部包括微生物在內的各種微小塵埃。

通過電動裝置使空氣通過高效過濾器具后進入工作臺面，使臺面始終保持在流動無菌空氣控制之下。

而且在接近外部的一方有一道高速流動的氣簾防止外部帶菌空氣進入。 
在條件較困難的地方，也可以用木制無菌箱代替超凈臺。無菌箱結構簡單，便于移動，箱正面開有兩個洞，不操作時用推拉式小門擋住，操作時可以將雙臂伸進去。

正面上部裝有玻璃，便于在內部操作，箱內部裝有紫外線燈，從側面小門可以放進去器具和菌種等。

四、應用：
無菌室一個應用行業非常廣泛的基礎性配套產業，目前在電子信息、半導體、光電子、精密制造、醫藥衛生、生物工程、航天、汽車噴涂等眾多行業均有應用，并根據行業的精密與無塵要求，等級差別也較大。 
目前級別zui高的當屬航天的倉，基本是屬于1級，屬于特殊領域，面積相對較小。 
另外對級別要求較高的是生化實驗室和高精納米材料生產車間，物聯網芯片的發展將是未來需求的一大方向。 
隨著電子元器件向微小化方向發展，液晶面板已經升級至第八代，行業需求非常巨大。

五、的要求：
1．工作室應矮小、平整，面積只需4米2左右，高2.2—2.3米，內部裝修應平整、光滑，無凹凸不平或棱角等，四壁及屋頂應用不透水之材質，便于擦洗及殺菌 
2．室內采光面積大，從室外應能看到室內情況。 

3．為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設緩沖走廊，走廊旁再設緩沖間，其面積可小于無菌室。 

4．無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設有日光燈及供消毒空氣用紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以1米為宜 ，其電源開關均應設在室外。 

5．無菌室與緩沖間進出口應設拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門應錯開，以免空氣對流造成污染。 

六、的使用與管理： 
（1） 無菌室應保持清潔整齊，室內僅存放必須的檢驗用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環、玻璃鉛筆等。不要放與檢測無關的物品 

（2） 室內檢驗用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。 

（3） 每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，zui后紫外燈殺菌半小時 

（4）定期檢查室內空氣無菌狀況，細菌數應控制在10個以下，發現不符合要求時，應立即徹底消毒滅菌。無菌室無菌程度的測定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養基平板各3個（平板直徑均9厘米），置無菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時，然后倒置進行培養，測細菌總數應置37℃溫箱培養48小時；測霉菌數則應置27℃溫箱培養5天。細菌`霉菌總數均不得超過10個為 。 

（5）無菌室殺菌前，應將所有物品置于操作之部位（待檢物例外），然后打開紫外燈殺菌30分鐘，時間一到，關閉紫外燈待用 

（6）進入無菌室前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。 

（7）操作應嚴格按照無菌操作規定進行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環境的無菌狀態。
器材及場所的滅菌消毒。

微生物檢驗用器材及場所必須進行滅菌或消毒處理，不同的對象采用不同的處理方法； 
1．高壓蒸汽滅菌: 工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內，一般采用121℃滅菌半小時,當然不同的培養基有不同的要求,應分別處理。 

2．火焰滅菌： 接種針、接種環等可直接火焰滅菌 

3．高溫干燥滅菌： 各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃滅菌2小時 

4．一 般消毒: 無菌室內的凳、工作臺、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進行滅菌，必須用其他方法進行消毒處理，采用2%石炭酸或來...溶液擦拭消毒，工作人員的手也用此法進行消毒。 

5． 空氣的消毒： 開啟紫外燈照射30—60分鐘 即可。

七、操作要領：
準備工作
1．先進行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30—60分鐘 

2．檢驗用的有關器材， 搬入無菌室前必須分別進會滅菌消毒 

3．操作人員必須將手清洗消毒，穿戴好無菌工作衣、帽和鞋，才能進入無菌室 

4．進入無菌室后再一次消毒手部，然后才進行檢驗操作 

八、操作過程注意事項：
1．動作要輕，不能太快，以免攪動空氣增加污染；玻璃器皿也應輕取輕放，以免破損污染環境 

2．操作應在近火焰區進行。 

3．接種環、接種針等金屬器材使用前后均需灼燒，灼燒時先通過內焰，使殘物烘干后再灼燒滅菌 

4．使用吸管時，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必須用洗耳球操作。 

5．觀察平板時不好 開蓋，如欲沾取菌落檢查時，必需靠近火焰區操作，平皿蓋也不能 大開，而是上下蓋適當開縫。 

6．進行可疑致病菌涂片染色時，應使用夾子夾持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用過的玻片也應置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗滌。 
7．工作結束，收拾好工作臺上的樣品及器材，zui后用消毒液擦拭工作臺。 

九、微粒污染控制：
無菌室外源性污染源，主要是通過門和無菌室內外通道侵入的室外空氣。因此無菌室的布置通常都采用按照工藝操作的關鍵程度，潔凈度的高低由里往外逐級減弱，抵御室外污染空氣的侵入。

同時為物料和人員進出無菌室設置相應的控制措施，例如物料的氣閘、人員的無菌更衣系統以及室內廢棄物傳遞出來的通道等。無菌室內的污染源，主要來自于無菌室內必要的操作人員和部分工藝設備，通常無菌室內操作人員的四周區域是潔凈度zui差的區域，也是無菌技術中重要的控制內容。
 
在無菌室的設計中，通過向室內輸送定量的潔凈空氣，稀釋置換室內已使用過的潔凈空氣，將臟空氣排出室外，使室內的空氣潔凈度等級達到100000級、10000級或局部達到100級的空氣潔凈度要求，室內已使用過的臟空氣由清潔的空氣取代，在空氣的稀釋置換設計中，臟空氣與清潔空氣持續地混合稀釋，逐漸減少房間中的微粒負荷。

置換稀釋設計對潔凈區域的空氣凈化系統的設計有很高的要求，而且必須考慮無菌室的布局和操作方式，還要為關鍵區間提供合適的局部單向空氣流動保護，需要注意與空氣凈化系統供應的空氣一樣，滿布高效空氣過濾器的單向流動罩產生的空氣流動也可以置換稀釋房間中空氣傳播的微粒，這種空氣流動會增加有效的房間空氣交換率，并有助于污染空氣置換稀釋。

無菌室內空氣置換稀釋污染系統設計時應注意：潔凈空氣供應的體積應足以抵消空間中不斷產生的微粒數，以此維持工藝操作的基本條件要求；室內空間供應的空氣應比普通維持條件下空氣更清潔；要求混合供應的清潔空氣應滿足去除房間內含有微粒的空氣，以達到室內空氣置換稀釋的作用。

無菌室內天花板應與風管、管道、燈具、風口等的安裝脫開，光滑、無裂縫，易于清洗。無菌室的門窗材料應選擇耐受性好、自然變形小、制造誤差小、容易控制縫隙、氣密性好的材料，采用雙層中空玻璃結構的雙層窗，既節約空間、又節約能源，還可以避免玻璃窗結露引起霉變，造成污染；窗盡量采用大玻璃，這樣可減少積灰點，又有利于清潔工作。
 

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